Monkeypox Virus Real Time PCR Kit

အတိုချုံးဖော်ပြချက်-

ကြောင်။မရှိ	B001P-01	အရွယ်အစား	48 စမ်းသပ်မှု/အစုံ
နမူနာ	Serum/ Lesion Exudate ၊	Trans& စတို.အပူချိန်	-25～-15℃
ပုံစံ	Premix ကို lyophilized လုပ်ပြီး 8 strip PCR ပြွန်များဖြင့် ရောစပ်ထားသည်။
အသုံးပြုနိုင်သော တူရိယာ	ABI7500၊ Bio-Rad CFX96၊ SLAN-96S၊ QuantStudio နှင့် BTK-8 ကဲ့သို့သော အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR တူရိယာ

ကျွန်ုပ်တို့ထံ အီးမေးလ်ပို့ပါ။

ထုတ်ကုန်အသေးစိတ်

ထုတ်ကုန်အမှတ်အသား

ကုန်ပစ္စည်းအသေးစိတ်

အသုံးပြုရန်ရည်ရွယ်လျက်

၎င်းကို အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR စနစ်များကိုအသုံးပြုခြင်းဖြင့် လူ့သွေးရည်ကြည် သို့မဟုတ် ဒဏ်ရာအဆိပ်ထုတ်နမူနာများတွင် Monkeypox Virus ကို ရှာဖွေတွေ့ရှိရန်အတွက် အသုံးပြုသည်။

စာမေးပွဲမူလ

ဤထုတ်ကုန်သည် fluorescent probe-based Taqman® အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR စစ်ဆေးမှုစနစ်ဖြစ်သည်။Monkeypox Virus ၏ F3L မျိုးရိုးဗီဇကို ထောက်လှမ်းရန်အတွက် သီးခြား primers နှင့် probes များကို ဒီဇိုင်းထုတ်ထားပါသည်။လူသားထိန်းသိမ်းထားသော မျိုးရိုးဗီဇကို ပစ်မှတ်ထားကာ အတွင်းပိုင်းထိန်းချုပ်မှုသည် နမူနာစုဆောင်းမှု၊ နမူနာကိုင်တွယ်မှုနှင့် အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR လုပ်ငန်းစဉ်များကို စောင့်ကြည့်စစ်ဆေးသည်။ဤကိရိယာသည် Monkeypox Virus ရှာဖွေတွေ့ရှိမှုအတွက် လိုအပ်သောပစ္စည်းများ- nucleic acid amplification enzyme, UDG enzyme, reaction buffer, specific primer နှင့် probe တို့ပါ၀င်သော အပြည့်အဝ premix lyophilized စနစ်တစ်ခုဖြစ်သည်။

အဓိက အကြောင်းအရာများ

ပေးထားသော အစိတ်အပိုင်းများကို ဇယားတွင် ဖော်ပြထားပါသည်။

အစိတ်အပိုင်းများ	အထုပ်	ပါဝင်ပစ္စည်း
Monkeypox ဗိုင်းရပ်စ်Lyophilized Premix	PCR ပြွန် ၈ လုံး× ၆ အိတ်	Primers၊ probes၊ dNTP/dUTP ရောနှော၊ Mg2+၊ Taq DNA polymerase၊ UDG အင်ဇိုင်း
MPV အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှု	400 μL × 1 ပြွန်	Target gene ပါရှိသော DNA sequences များ
MPV Negative ထိန်းချုပ်မှု	400 μL × 1 ပြွန်	လူ့ဗီဇအပိုင်းပါရှိသော DNA ဆင့်ပွားများ
ပျော်ဝင်ဖြေရှင်းချက်	1 mL × 1 ပြွန်	Stabilizer
ညီညွတ်မှုလက်မှတ်	1 အပိုင်းအစ	/

လည်ပတ်စီးဆင်းမှု

1. နမူနာစုဆောင်းမှု:နမူနာများကို ပိုးမွှားပြွန်များအတွင်းသို့ စနစ်တကျ စုဆောင်းထားသင့်သည်။

စံနည်းပညာသတ်မှတ်ချက်များနှင့်။

2. Reagent ကြိုတင်ပြင်ဆင်ခြင်း (Reagent Preparation Area)

ကိရိယာ၏ အစိတ်အပိုင်းများကို ဖယ်ထုတ်ပြီး အသင့်အနေအထားအသုံးပြုနိုင်ရန် အခန်းအပူချိန်တွင် ချိန်ညှိပါ။

3. နမူနာထုတ်ယူခြင်း (Specimen Processing Area)

3.1 Nucleic acid ထုတ်ယူခြင်း။

ဗိုင်းရပ်စ် DNA ထုတ်ယူမှုသေတ္တာများ၏ သက်ဆိုင်သောလိုအပ်ချက်များနှင့် လုပ်ထုံးလုပ်နည်းများအရ nucleic acid ထုတ်ယူမှုအတွက် 200μL အရည်နမူနာများ၊ Positive Control နှင့် Negative Control ကိုယူရန် အကြံပြုထားသည်။

3.2 Lyophilized အမှုန့်ပျော်ဝင်ခြင်းနှင့် ပုံစံပလိတ်ထပ်တိုးခြင်း။

နမူနာအရေအတွက်အရ Monkeypox Virus Lyophilized premix ကို ပြင်ဆင်ပါ။နမူနာတစ်ခုတွင် Lyophilized premix အမှုန့်ပါရှိသော PCR ပြွန်တစ်ခု လိုအပ်သည်။အဆိုးမြင်ထိန်းချုပ်မှုနှင့် အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှုကို နမူနာနှစ်ခုအဖြစ် သဘောထားသင့်သည်။

(1) Lyophilized premix ပါရှိသော PCR tube တစ်ခုစီတွင် 15μL Dissolving Solution ကို ပေါင်းထည့်ကာ 5μL ထုတ်ယူထားသော နမူနာများ/ Negative Control/ Positive Control ကို PCR tube တစ်ခုစီသို့ အသီးသီးထည့်ပါ။

(2) PCR ပြွန်များကို တင်းတင်းကြပ်ကြပ် ဖုံးအုပ်ကာ၊ lyophilized အမှုန့်များ လုံးဝပျော်ဝင်ပြီး ရောနှောသွားသည်အထိ PCR ပြွန်များကို တင်းကျပ်စွာ ဖုံးအုပ်ကာ အရည်များကို ချက်ခြင်း မြန်နှုန်းနိမ့် centrifugation ဖြင့် PCR ပြွန်အောက်ခြေအထိ စုစည်းပါ။

(၃) ထောက်လှမ်းရန်အတွက် ယေဘူယျအချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR တူရိယာကိုအသုံးပြုပါက၊ ထို့နောက် PCR ပြွန်များကို အသံချဲ့ထွင်သည့်ဧရိယာသို့ တိုက်ရိုက်လွှဲပြောင်းပါ။ထောက်လှမ်းရန်အတွက် BTK-8 ကိုအသုံးပြုပါက အောက်ပါလုပ်ဆောင်ချက်များကို လုပ်ဆောင်ရန် လိုအပ်သည်- PCR ပြွန်မှ 10 μL အရည်ကို BTK-8 ၏ တုံ့ပြန်မှု ချစ်ပ်တွင်းသို့ လွှဲပြောင်းပါ။PCR ပြွန်တစ်ခုသည် ချစ်ပ်ပေါ်ရှိ ရေတွင်းတစ်ခုနှင့် ကိုက်ညီသည်။ပိုက်ပိုက်လုပ်ငန်းဆောင်ရွက်နေစဉ်အတွင်း pipette သည် 90 ဒီဂရီဒေါင်လိုက်ဖြစ်ကြောင်း သေချာပါစေ။aerosol barrier pipette အကြံပြုချက်များကို ရေတွင်း၏အလယ်ဗဟိုတွင် အလယ်အလတ်အင်အားဖြင့် ထားသင့်ပြီး ပထမဂီယာသို့ရောက်ရှိသောအခါ pipette အား တွန်းခြင်းကို ရပ်သင့်သည် (ပူဖောင်းများမဖြစ်စေရန်)။ရေတွင်းများ ဖြည့်ပြီးနောက်၊ ရေတွင်းအားလုံးကို ဖုံးအုပ်ရန် တုံ့ပြန်မှု ချစ်ပ်အမြှေးပါးကို ထုတ်ယူပြီး ချစ်ပ်ပြားကို အသံချဲ့ထွင်မှု ဖော်ထုတ်ခြင်း ဧရိယာသို့ လွှဲပြောင်းပါ။

4. PCR ချဲ့ထွင်ခြင်း (ထောက်လှမ်းဧရိယာ)

4.1 PCR ပြွန်များ/တုံ့ပြန်မှု ချစ်ပ်များကို တုံ့ပြန်မှုကန်ထဲသို့ ထည့်ပြီး တုံ့ပြန်မှုတစ်ခုစီ၏ အမည်များကို သက်ဆိုင်ရာ အစီအစဉ်အတိုင်း ကောင်းစွာ သတ်မှတ်ပါ။

4.2 ထောက်လှမ်းမှု fluorescence ဆက်တင်များ- (1) Monkeypox ဗိုင်းရပ်စ် (FAM);(၂) Internal Control (CY5)။

4.3 အောက်ပါ စက်ဘီးစီးခြင်း ပရိုတိုကောကို လုပ်ဆောင်ပါ။

ABI7500၊ Bio-Rad CFX96၊ SLAN-96S၊ QuantStudio ၏ Protocol-

ခြေလှမ်းများ		အပူချိန်	အချိန်	ဟုတ်ရဲ့လား။
1	အကြို denaturation	95 ℃	2 မိနစ်	1
2	Denaturation	95 ℃	10 s	45
2	Annealing, extension, fluorescence ရယူခြင်း။	60 ℃	30 s	45

BTK-8 ၏ ပရိုတိုကော-

ခြေလှမ်းများ		အပူချိန်	အချိန်	ဟုတ်ရဲ့လား။
1	အကြို denaturation	95 ℃	2 မိနစ်	1
2	Denaturation	95 ℃	၅ ၎	45
2	Annealing, extension, fluorescence ရယူခြင်း။	60 ℃	၁၄ ၎	45

5. ရလဒ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း (ကျေးဇူးပြု၍ တူရိယာအသုံးပြုသူလက်စွဲကို ကိုးကားပါ)

တုံ့ပြန်မှုပြီးနောက်၊ ရလဒ်များကို အလိုအလျောက် သိမ်းဆည်းမည်ဖြစ်သည်။ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် "Analyze" ကိုနှိပ်ပါ၊ ထို့နောက် ကိရိယာသည် ရလဒ်ကော်လံရှိ နမူနာတစ်ခုစီ၏ Ct တန်ဖိုးများကို အလိုအလျောက် ဘာသာပြန်ပေးပါမည်။အနုတ်လက္ခဏာနှင့် အပြုသဘောဆောင်သော ထိန်းချုပ်မှုရလဒ်များသည် အောက်ပါ "6. အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု" နှင့် ကိုက်ညီရမည်။

6. အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု

6.1 အနုတ်လက္ခဏာထိန်းချုပ်မှု- FAM ချန်နယ်တွင် Ct သို့မဟုတ် Ct>40 မရှိပါ၊ ပုံမှန်အသံချဲ့စက်မျဉ်းဖြင့် CY5 ချန်နယ်တွင် Ct≤40။

6.2 အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှု- ပုံမှန်အသံချဲ့စက်မျဉ်းနှင့်အတူ FAM ချန်နယ်တွင် Ct≤35၊ ပုံမှန်ချဲ့ထွင်မှုမျဉ်းကွေးနှင့်အတူ Ct≤40။

6.3 အထက်ဖော်ပြပါ သတ်မှတ်ချက်များနှင့် ကိုက်ညီပါက ရလဒ်သည် မှန်ကန်ပါသည်။မဟုတ်ပါက ရလဒ်သည် မမှန်ကန်ပါ။

ရလဒ်စကားပြန်

အောက်ပါရလဒ်များ ဖြစ်နိုင်သည်-

	FAM ချန်နယ်၏ Ct တန်ဖိုး	CY5 ချန်နယ်၏ Ct တန်ဖိုး	စကားပြန်
1#	Ct သို့မဟုတ် Ct>40 မရှိပါ။	≤40	Monkeypox ဗိုင်းရပ်စ် အနုတ်လက္ခဏာ
2#	≤40	ရလဒ်တစ်ခုခု	Monkeypox virus positive ပါ။
3#	၄၀ မှ ၄၅	≤40	ပြန်လည်စမ်းသပ်မှု;40 ~ 45 ဖြစ်သေးပါက 1# အဖြစ် သတင်းပို့ပါ။
4#	Ct သို့မဟုတ် Ct>40 မရှိပါ။	Ct သို့မဟုတ် Ct>40 မရှိပါ။	မမှန်ပါ။

မှတ်ချက်: မမှန်ကန်သောရလဒ်ဖြစ်ပေါ်ပါက နမူနာကို စုဆောင်းပြီး ထပ်မံစမ်းသပ်ရန် လိုအပ်ပါသည်။

အော်ဒါအချက်အလက်

ထုတ်ကုန်အမည်	ကြောင်။မရှိ	အရွယ်အစား	နမူနာ	စင်ဘဝ	Trans& စတို.အပူချိန်
Monkeypox Virus Real Time PCR Kit	B001P-01	48 စမ်းသပ်မှု / အစုံ	Serum/ Lesion Exudate ၊	12 လ	-25～-15℃